嘔吐毒素檢測試劑盒

嘔吐毒素檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）使用說(shuō)明書(shū)：

1、原理及用途：

脫氧雪腐鐮刀菌烯醇又稱(chēng)嘔吐毒素，由禾谷鐮刀菌產(chǎn)生，常出現在玉米(穗腐病)、小麥和大麥(赤霉病)上。我國谷物中DON的標準為1.0mg/kg。

本試劑盒采用間接競爭ELISA方法檢測大米、小米、面等谷物及飼料樣本中的嘔吐毒素(Deoxynivalenol，DON)，試劑盒由預包被偶聯(lián)抗原的酶標板、辣根酶標記物、抗體、標準品及其他配套試劑組成。檢測時(shí)，加入標準品或樣本溶液，樣本中的嘔吐毒素和酶標板上預包被偶聯(lián)抗原競爭抗嘔吐毒素抗體，加入酶標記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光度值與其所含嘔吐毒素含量成負相關(guān)，與標準曲線(xiàn)比較即可得出樣本中嘔吐毒素的殘留量。

2、技術(shù)指標：

2.1、試劑盒靈敏度：10ppb(ng/ml)

2.2、反應模式：25℃，30～15min

2.3、檢測下限：

谷物、飼料…………………………………200ppb

2.4、交叉反應率：

嘔吐毒素……………………………………100%

3-乙?；撗跹└牭毒┐?#8230;…………<1%

2.5、樣本回收率：

谷物、飼料……………………………85%±15%

3、試劑盒組成：

酶標板………………………………………96孔

標準品(黑蓋)：各1ml

0ppb、10ppb、30ppb、90ppb、270ppb、810ppb

酶標記物(紅蓋)…………………5.5ml

抗體工作液(藍蓋) ………………5.5ml

底物液A(白蓋)……………………6ml

底物液B(黑蓋)……………………6ml

終止液(黃蓋)………………………6ml

20×濃縮洗滌液(白蓋)……………40ml

復溶液(黃蓋)………………………50ml

說(shuō)明書(shū)…………………………………1份

蓋板膜…………………………………1張

自封袋…………………………………1個(gè)

4、需要的器材和試劑：

4.1、儀器：酶標儀、打印機、均質(zhì)器、振蕩器、離心機、刻度移液管、天平(感量0.01g)

4.2、微量移液器：?jiǎn)蔚?0µl-200µl，100µl-1000µl、多道300µl

5、樣本前處理：

5.1、樣本處理前須知：

實(shí)驗器具必須潔凈并使用一次性吸頭，以避免污染干擾實(shí)驗結果

5.2、配液：

配液1：工作洗滌液

將濃縮洗滌液20倍稀釋(1份洗滌液加19份去離子水)

5.3、樣本前處理步驟：

5.3.1、谷物（大米、玉米、小米、麥麩等）及飼料處理方法

1)稱(chēng)取2g±0.05g粉碎樣本于50ml離心管中，加20ml去離子水，振蕩5分鐘，室溫4000轉/分離心10分鐘

2)取0.5ml上清，加入0.5ml復溶液，混勻

3)取50µl進(jìn)行分析

樣本稀釋倍數：20，檢測下限：200ppb

注：由于毒素在樣本中的分布呈非均勻狀態(tài)，取樣時(shí)需多點(diǎn)取樣充分混勻后再取2g進(jìn)行試驗

6、酶聯(lián)免疫試驗步驟：

將所需試劑從4℃冷藏環(huán)境中取出，置于室溫平衡30min以上，洗滌液冷藏時(shí)可能會(huì )有結晶需恢復到室溫以充分溶解，每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數量的微孔板及框架，將不用的微孔板放入自封袋，保存于2-8℃

6.1、編號：將樣本和標準品對應微孔按序編號，每個(gè)樣本和標準品做2孔平行，并記錄標準孔和樣本孔所在的位置

6.2、加樣反應：加標準品或樣本50µl/孔到各自的微孔中，然后加酶標記物50µl/孔，再加入50µl/孔的抗體工作液，用蓋板膜封板，輕輕振蕩5秒混勻，25℃反應30分鐘

6.3、洗滌：小心揭開(kāi)蓋板膜，甩去孔內液體，每孔加350µl工作洗滌液，靜置30秒后棄去，重復洗滌5次，最后一次拍干(用吸水紙拍干，拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)

6.4、顯色：每孔加入底物液A50µl，再加底物液B50µl，輕輕振蕩5秒混勻，25℃避光顯色15分鐘(若藍色過(guò)淺，可適當延長(cháng)反應時(shí)間)

6.5、終止：每孔加入終止液50µl，輕輕振蕩混勻，終止反應

6.6、測吸光值：用酶標儀于450nm處測定每孔吸光度值(建議用雙波長(cháng)450/630nm)。測定應在終止反應后10分鐘內完成

7、結果分析：

7.1、百分吸光率的計算：

標準液或樣本的百分吸光率等于標準液或樣本的百分吸光度值的平均值(雙孔)除以第一個(gè)標準液(0ppb)的吸光度值，再乘以100%，即

百分吸光度值(%)=A/A0×100%

A—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值

A0—0ppb標準溶液的平均吸光度值

7.2、標準曲線(xiàn)的繪制與計算：

以標準液百分吸光率為縱坐標，對應的標準液濃度(ppb)的對數為橫坐標，繪制標準液的半對數曲線(xiàn)圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線(xiàn)中，從標準曲線(xiàn)上讀出樣本所對應的濃度，乘以其對應的稀釋倍數即為樣本中待測物的實(shí)際濃度

若利用試劑盒專(zhuān)業(yè)分析軟件進(jìn)行計算，更便于大量樣本的準確、快速分析(歡迎來(lái)電索取)

8、注意事項：

8.1、室溫低于25℃或試劑及樣本沒(méi)有回到室溫(25℃)會(huì )導致所有標準的OD值偏低

8.2、在洗板過(guò)程中如果出現板孔干燥的情況，則會(huì )出現標準曲線(xiàn)不成線(xiàn)性，重復性不好的現象。所以洗板拍干后應立即進(jìn)行下一步操作

8.3、混合要均勻，洗板要che底，在ELISA分析中的再現性，很大程度上取決于洗板的一致性

8.4、在所有孵育過(guò)程中，用蓋板膜封住微孔板，避免光線(xiàn)照射

8.5、不要使用過(guò)了有效期的試劑盒，不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑

8.6、顯色液若有任何顏色表明變質(zhì)，應當棄之。0標準的吸光度值小于0.5個(gè)單位(A450nm< 0.5 )時(shí)，表示試劑可能變質(zhì)

8.7、反應終止液有腐蝕性，避免接觸皮膚

9、嘔吐毒素檢測試劑盒貯藏及保存期：

儲藏條件：試劑盒于2-8℃保存，避免冷凍。

保質(zhì)期：該產(chǎn)品有效期為1年，生產(chǎn)日期見(jiàn)包裝盒。