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    植物硝酸還原酶(NR)ELISA試劑盒

    更新時(shí)間：2023-05-30

    簡(jiǎn)要描述：

    植物硝酸還原酶(NR)ELISA試劑盒廠(chǎng)家應用雙抗體夾心法測定標本中硝酸還原酶(NR)水平。用純化的硝酸還原酶(NR)捕獲抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被的微孔中依次加入硝酸還原酶(NR)，再與HRP標記的檢測抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過(guò)洗滌后加底物TMB顯色。

    型號：96T/48T點(diǎn)擊量：557

    供貨周期現貨應用領(lǐng)域醫療衛生,化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥,綜合
    　　植物硝酸還原酶(NR)ELISA試劑盒廠(chǎng)家
     
    　　一、實(shí)驗原理：
     
    　　本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中硝酸還原酶(NR)水平。用純化的硝酸還原酶(NR)捕獲抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被的微孔中依次加入硝酸還原酶(NR)，再與HRP標記的檢測抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過(guò)洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的硝酸還原酶(NR)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長(cháng)下測定吸光度(OD值)，通過(guò)標準曲線(xiàn)計算樣品中硝酸還原酶(NR)含量。
     
    　　二、植物硝酸還原酶(NR)ELISA試劑盒組成：
     

    試劑盒組成

    48孔配置

    96孔配置

    保存

    說(shuō)明書(shū)

    1份

    1份

    		  

    封板膜

    2片

    2片

    		  

    密封袋

    1個(gè)

    1個(gè)

    		  

    酶標包被板

    1×48

    1×96

    2-8℃保存

    標準品

    0.3ml×6管

    0.3ml×6管

    2-8℃保存

    酶標試劑

    5 ml×1瓶

    10 ml×1瓶

    2-8℃保存

    樣品稀釋液

    3 ml×1瓶

    6 ml×1瓶

    2-8℃保存

    顯色劑A液

    3 ml×1瓶

    6 ml×1瓶

    2-8℃保存

    顯色劑B液

    3 ml×1瓶

    6 ml×1瓶

    2-8℃保存

    終止液

    3 ml×1瓶

    6 ml×1瓶

    2-8℃保存

    20×濃縮洗滌液

    15ml×1瓶

    25ml×1瓶

    2-8℃保存

     

    　　三、樣本處理及要求：
     
    　　1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清，保存過(guò)程中如出現沉淀，應再次離心。
     
    　　2. 血漿：應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應該再次離心。
     
    　　3. 尿液：用無(wú)菌管收集，離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。
     
    　　4. 細胞培養上清：檢測分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時(shí)，用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。
     
    　　5. 組織標本：切割標本后，稱(chēng)取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4)，用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
     
    　　6. 標本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻進(jìn)行，提取后應盡快進(jìn)行實(shí)驗。若不能馬上進(jìn)行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融.
     
    　　7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。
     
    　　四、操作步驟
     
    　　1、標準品的加樣：設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；
     
    　　2、加樣：分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
     
    　　3、加酶：每孔加入酶標試劑100μl，空白孔除外。
     
    　　4、溫育：用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘。
     
    　　5、配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。
     
    　　6、洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
     
    　　7、顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
     
    　　8、終止：每孔加終止液50μl，終止反應(此時(shí)藍色立轉黃色)。
     
    　　9、測定：以空白孔調零，450nm波長(cháng)依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以?xún)冗M(jìn)行。
     
    　　五、注意事項：
     
    　　1、試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開(kāi)封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。樣本在使用前也要在室溫平衡60分鐘。
     
    　　2、濃洗滌液可能會(huì )有結晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結果。
     
    　　3、各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時(shí)間最好控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。
     
    　　4、請每次測定的同時(shí)做標準曲線(xiàn)，最好做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過(guò)高(樣本OD值大于標準品孔第一孔的OD值)，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定，計算時(shí)請最后乘以總稀釋倍數(×n×5)。
     
    　　5、封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
     
    　　6、底物請避光保存。
     
    　　7、嚴格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
     
    　　8、所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
     
    　　9、本試劑不同批號組分不得混用。
     
    　　10. 如與英文說(shuō)明書(shū)有異，以英文說(shuō)明書(shū)為準。
     
    　　六、計算：
     
    　　以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線(xiàn)，根據樣品的OD值由標準曲線(xiàn)查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標
    準曲線(xiàn)的直線(xiàn)回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實(shí)際濃度。
     
    　　七、試劑盒性能：
     
    　　1.樣品線(xiàn)性回歸與預期濃度相關(guān)系數R值為0.95以上。
     
    　　2.批內變異系數與批間變異系數應分別小于10%和15% 。
     

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